Jolanta Krzysztoń-Russjan, Iza Książek, Elżbieta Anuszewska
Porównanie użyteczności testów MTT i EZ4U stosowanych do oceny cytotoksyczności ksenobiotyków
2009-06-25
Cel pracy. Celem pracy było porównanie użyteczności testów MTT oraz EZ4U do oceny aktywności doksorubicyny. Porównanie to przeprowadzono z zastosowaniem różnych linii komórkowych, tj.: komórek ludzkiego czerniaka - ME18, - ME18/R, prawidłowych fibroblastów ludzkich - WS1, fibroblastów mysich - L929 oraz komórek raka szyjki macicy - HeLa.
Wyniki. Analiza wartości IC50 dla doksorubicyny uzyskanych dla w/w linii uwzględniała powtarzalność pomiaru (zmienność wewnątrz eksperymentalna -%RDSw) i precyzję pośrednią (zmienność między eksperymentalną -%RDSm). Najwyższą zgodność obu testów odzwierciedloną w wartościach IC50 dla doksorubicyny, uzyskano dla komórek linii HeLa (MTT IC50 = 0,28 vs. EZ4U IC50 = 0,27 mg/ml) z precyzją odpowiednio -24 vs. -11,2%. Dla komórek linii WS1 i L929 uzyskano blisko dwukrotnie niższe wartości IC50 w teście MTT niż w EZ4U odpowiednio 0,21 i 0,22 vs. 0,44 i 0,52 mg/ml, z precyzją dla testu MTT odpowiednio - 32,6 i - 35,2%, zaś dla testu EZ4U - 5,8 i - 4,0%. W teście MTT wartość IC50 dla komórek ME18 była 2,4 razy wyższa niż w teście EZ4U (0,6 vs. 0,25 mg/ml). Wartości te uzyskano z precyzją dla testu MTT - 20,5%, zaś dla testu EZ4U - 12,0%. Dla komórek linii ME18/R nie udało się wyznaczyć wartości IC50 w teście MTT w badanym zakresie stężeń doksorubicyny, zaś w teście EZ4U wartość ta wynosiła 34,4 mg/ml i była określona z precyzją - 5,8%.
Wnioski. Wyniki uzyskane w niniejszej pracy z zastosowaniem testów MTT i EZ4U pozwalają na stwierdzenie użyteczności obu technik w badaniach cytotoksyczności doksorubicyny. Wyniki uzyskane w teście EZ4U charakteryzowały się znacznie wyższą precyzją oraz powtarzalnością (wyniki zamieszczone w artykule) niż w teście MTT. Test EZ4U pozwolił na określenie wartości IC50 w badanym zakresie stężeń doksorubicyny dla wszystkich badanych linii, był łatwiejszy w wykonaniu i mniej czasochłonny niż MTT.
Słowa kluczowe: cytotoksyczność, test MTT, test EZ4U, doksorubicyna